Repose sur la relative spécificité d’interaction d’une protéine pour certains ligands

- Injection de la solution protéique en haut de la colonne
- Liaison de la protéine d’intérêt au ligand
- Elution de la protéine d’intérêt

• Lavage avec une solution d’un composé qui a une plus forte affinité pour la protéine d’intérêt que le ligand
• Modification des propriétés de la solution pH, … force ionique, afin de déstabiliser le complexe ligand-protéine

Les protéines sont séparées selon leur taille et leurs formes
Phase stationnaire : billes de gel dont les pores laissent passer les petites molécules
Ex de gel : dextran (cephadex)
Agarose
Polyacrylamide

La phase stationnaire est un échangeur d’ions … par une résine porteuse de groupement ionisés négativement ou positivement ; exercent des interactions de type électrostatiques avec des solutés ioniques du milieu

Résine C+ + protéine chargé + résine-protéine chargé + + C+

Ex de résine : résine substitué par des groupements sulfonate (SO2…) résine échangeuse de cations

Le pHi est le pH isoélectrique d’une protéine c’est-à-dire le pH où la protéine a une charge nette nulle
- Une protéine a une charge + à pH<pHi
- Une protéine a une charge – à pH>pHi

Elle peut être retenue suivant le cas sur
- Un échangeur de cations (C+)
- Un échangeur d’anion (A-)

Echangeur d’anions (A-) = gel porteurs de charges fixes positives
Echangeuse de cation (C+) = porteurs de charges fixes négatives
Résine+A- + protéine- Résine+protéine- + A-
Echangeur d’A-

• Mise en solution de la protéine ou des AA dans une solution de pH et [sel] tels que la protéine est immobilisée sur l’échangeur d’ion choisi
• Injection de la solution en haut de la colonne
• Liaison des protéines ou AA à l’échangeur d’ion avec des affinités différentes
• Elution : lavage de la colonne avec des solution tampons de pH et de [sel] différente : plus l’affinité de la molécule pour l’échangeur est forte, plus sa migration est retardée

-> Permet de séparer et d’analyser les constituants d’un mélange en le faisant circuler à travers une colonne contenant un support solide poreux inerte = phase stationnaire à l’aide d’un solvant mobile (gaz, liquide) qui l’entraine

Du fait de leur solubilité dans la phase mobile et de leurs interactions avec la phase stationnaire, chacune a une vitesse de migration qui lui est propre